Small Interfering RNA Induced Knockdown of Green Fluorescent Protein Using Synthetic RNA Molecules

Los ARNs de interferencia pequenos pueden ser introducidos en las celulas y provocar el silenciamiento de determinados genes. Este fenomeno de ARN interferencia puede ser utilizado en la determinacion de la funcion de los genes en la celula. Los ARNs de interferencia de pequeno tamano se pueden obtener por via quimica, utilizando sintetizadores comunes de ADN/ARN con una calidad adecuada para mediar el fenomeno de ARN interferencia. En este trabajo presentamos la obtencion de estas moleculas en el Centro de Ingenieria Genetica y Biotecnologia de Cuba y su evaluacion en el silenciamiento de la proteina fluorescente verde en celulas de mamiferos. La expresion de eGFP fue visualizada a las 24 y 48 h despues de la transfeccion en celulas HEK293 en un microscopio de fluorescencia. Se observo que el ARN doble cadena denominado B silencio la eGFP a las 48 h despues de la transfeccion a una dosis de 120 nM. No se observo silenciamiento evidente de la expresion de la proteina con el ARN doble cadena denominado A Estos resultados fueron corroborados mediante analisis por Northem Blot