Impact Des Isoformes E6 Sur Le Métabolisme Des ARN Dans Les Cancers Associés Aux HPV

Les papillomavirus humains (HPV) sont des petits virus non enveloppes a ADN double brin infectant les epitheliums cutanes et muqueux. L'infection par un HPV a tropisme muqueux est l'infection sexuellement transmissible la plus prevalente chez l'espece humaine. Si une infection par l'un des quelques 200 types d'HPV est le plus souvent asymptomatique, certains types infectant les muqueuses sont capables d'induire des cancers. Ces HPVhr (HPV a haut risque oncogenique) etaient responsable de 690000 cas de cancers en 2018 dans le monde. Le genotype HPV16 est responsable a lui seul de 65% de ces cancers. La capacite d'HPV16 a provoquer des cancers provient de plusieurs .carncteristque.s.propr.e.s.auxlIPVhLL'expression.continue ... des ... oncoproteines .. :v:irales .. E6. ... et.E2 .. fait progressivement perdre leur homeostasie aux cellules infectees, a travers l'induction de la degradation de p53 et pRb notamment. Des centaines d'autres proteines cellulaires voient aussi leurs fonctions deregulees par les deux oncoproteines et entrainent la transformation du phenotype cellulaire. La regulation de l'expression des genes viraux au niveau post-transcriptionnel participe a reguler l'expression des oncoproteines principalement par epissage alternatif. Contrairement aux autres HPV, les HPVhr produisent un seul transcrit bicistronique E6E7 pour coder les deux oncoproteines et c'est l'epissage de ce transcrit dans la region codant E6 qui regule leur expression. De maniere interessante, l'evenement d'epissage majoritaire aboutit a la formation d'un transcrit mature ne pouvant plus coder E6 mais ayant la capacite de produire une isoforme tronquee appelee E6*I. Cette caracteristique singuliere partagee par les HPVhr pose la question de la place de l'epissage alternatif et de }'isoforme tronquee E6*I dans le processus de carcinogenese. Cette place n'est que peu definie voir controversee dans la litterature. Les objectifs de ce travail de these ont donc ete i) de mesurer l'impact de l'expression ectopique d'E6*I d'HPV16 sur le transcriptome cellulaire et, ii) d'etudier les mecanismes moleculaires expliquant les deregulations induites par E6*I. L'impact de E6*I sur le transcriptome cellulaire a ete mesure par RNAseq et revele que l'expression stable de E6*I dans le modele HPV negatif U-2 OS aboutit a la deregulation de l'expression de 53 genes, la ou l'expression stable de E6+E6*I deregule l'expression de 419 genes cellulaires. Etonnamment, seul 11 transcrits sont partages par ces deux conditions. Les 53 transcrits deregules par E6*I codent des proteines intervenant notamment dans le metabolisme du stress oxydant et s'accompagne d'une augmentation du taux d'especes reactives de l'oxygene au niveau phenotypique. L'absence de ces effets dans les U-2 OS exprimant E6+E6*I indique possiblement une relation dynamique entre les deux isoformes. Une partie de la controverse entourant le role de E6*I provient de sa detection impossible en condition physiologique. Nous avons montre ici pour la premiere fois que l'expression d'ARNm E6*I incapables d'etre traduits n'entraine pas de stress oxydant, prouvant que la production de la proteine E6*I est indispensable a l'induction de ce stress. L'etude de la prise en charge du transcrit E6*I par la machinerie traductionnelle via la technique de polysome profiling n'a en revanche pas permis de definir si E6*I est efficacement traduite. Nous avons enfin montre que l'induction du stress oxydant se fait majoritairement par une activation des proteines de la famille des NADPH oxydases. Des etudes ulterieures seront necessaires pour determiner l'implication precise des differents membres de cette famille generatrice de ROS.