抗SARS-CoV-2 IgG抗体第2代内控参考品的制备及其在ELISA检测方法中适用性的评价

目的 制备抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)IgG抗体第2代内控参考品(B2),并评价其在ELISA检测方法中的适用性.方法 在接种北京生物制品研究所有限责任公司生产的SARS-CoV-2灭活疫苗(BBIBP-CorV)志愿者中,初筛19份ELISA-IgG稀释倍数在20～60之间IgG抗体阳性的血浆,再采用ELISA法检测初筛血浆的IgG抗体、IgM抗体及中和抗体,选取ELISA-IgG稀释倍数在32～45之间、IgM阴性且中和抗体抑制率相近的非脂血血浆制备B2.用抗SARS-CoV-2免疫球蛋白第1代WHO国际标准品(NIBSC 20/136)标定第1代内控参考品(B1)、B2经ELISA法检测的中和抗体效价,并验证B2的加速稳定性(2～8 ℃分别放置5、8、14、20、30 d)、使用稳定性(18～25 ℃分别放置1、2、3 h)、冻融稳定性(1、2、3次)及长期稳定性(-25 ℃C放置10个月).以B2为标准品检测单份疫苗免疫后血浆,按照不同ELISA-IgG稀释倍数档位进行合并,制备不同档位的混合血浆,对混合血浆的ELISA-IgG稀释倍数与假病毒中和抗体效价进行相关性及线性回归分析.结果 19份血浆中,ELISA-IgG稀释倍数在32～45之间、IgM阴性且中和抗体抑制率接近的非脂血血浆共5份,每份血浆按等体积分数混合制备B2,其ELISA-IgG稀释倍数赋值为32.NIBSC 20/136标定的B1中和抗体效价为133.38 EIU/mL B2为122.14 EIU/mLoB2的加速稳定性、使用稳定性、冻融稳定性及长期稳定性回收率均在(100±15)％范围内.相同来源的混合血浆的ELISA-IgG稀释倍数与假病毒中和抗体效价均呈显著相关(R2均＞0.99,P均＜0.000 1).结论 以SARS-CoV-2灭活疫苗免疫后血浆为原料制备的B2可替代用COVID-19康复者恢复期血浆为原料制备的B1.