基于NLRP3信号通路探讨清开灵对肝纤维化大鼠的影响及作用机制

目的 明确清开灵口服液对CCl4 大鼠的抗肝纤维化作用,并基于NOD 样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor protein domain 3,NLRP3)炎症小体通路揭示其抗肝纤维化的机制.方法 44只SD大鼠随机分为空白组、模型组、清开灵口服液组(QKL组),应用CCl4 灌胃的方法建立中毒性肝纤维化大鼠模型,设置4周与8周两个时间点.实验结束后,检测各组大鼠肝、脾指数;HE染色和Masson染色观察肝组织结构变化与胶原纤维增生情况;检测血清天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidation,GSH-Px)含量;ELISA法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;免疫组化检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;采用West-ern blot、RT-PCR法检测肝组织NLRP3、衔接蛋白凋亡相关斑点样蛋白(adaptor protein apoptosis-related dot-like protein,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、α-SMA的蛋白和基因的表达水平.结果 与空白组相比,4周与8周模型组肝脾指数及AST、ALT、T-BIL、HYP含量均明显升高(P＜0.01)、GSH-Px活力显著下降(P＜0.01),IL-1β和TNF-α含量明显升高(P＜0.01),α-SMA、NL-RP3、ASC、Caspase-1的蛋白及基因表达水平均明显增加(P＜0.05).HE和Masson染色显示模型组肝组织形态结构紊乱,炎症细胞大量浸润,肝脏纤维组织增生更加明显.与模型组相比,同期清开灵组均可明显降低肝脾指数及血清AST、ALT、T-BIL含量和HYP含量(P＜0.05),提高GSH-Px活力(P＜0.05,P＜0.01),抑制TNF-α、IL-1β合成(P＜0.01,P＜0.05),减轻肝组织结构紊乱和炎细胞浸润,抑制胶原纤维增生,抑制α-SMA蛋白表达(P＜0.05),NLRP3、ASC和Caspase-1在蛋白和基因水平表达呈不同程度降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 清开灵口服液可显著抑制CCl4 导致的大鼠肝纤维化,提高肝脏抗氧化能力,改善肝功能,缓解炎症,其机制可能与抑制星状细胞活化、抑制NLRP3炎症小体通路活化相关.