博来霉素联合脂多糖诱导大鼠特发性肺纤维化急性加重动物模型的建立

目的 探索特发性肺纤维化急性加重大鼠动物模型的建立方法,以及诱导剂脂多糖的用法用量.方法 150只健康的雄性Wister大鼠,随机分为阴性对照组(Control组)、缓解期对照组(IPF组)、急性加重期对照组(BLM组)、脂多糖低剂量组(LPS-low组)、脂多糖中剂量组(LPS-mid组)、脂多糖高剂量组(LPS-high组),Control组采用首次经气管内注射0.9％氯化钠注射液联合二次经腹腔注射0.9％氯化钠注射液(0 d,0.1 mL/100 g,28 d,0.5 mL/100 g)诱导,IPF组采用首次经气管内注射博来霉素联合二次经腹腔注射0.9％氯化钠注射液(0 d,5 mg/mL,0.1 mL/100 g;28 d,0.5 mL/100g)诱导,BLM组用先后两次经气管内注射博来霉素(0 d,5 mg/mL,0.1 mL/100 g;28 d,7 mg/mL,0.1 mL/100 g)诱导,LPS-low组、LPS-mid组和LPS-high组采用首次经气管内注射博来霉素联合二次经腹腔注射脂多糖(0 d,博来霉素,5 mg/mL,0.1 mL/100 g;28 d,脂多糖,2.5 mg/mL、5 mg/mL、7.5 mg/mL,0.5 mL/100 g)诱导;实验于首次造模后31 d、35 d、42 d取材,观察大鼠生存情况、肺组织湿干重比(W/D)、肺系数、肺组织HE染色、肺组织Masson染色、肺CT、肺功能、动脉血气分析、支气管肺泡灌洗液(BALF)成分分析(总细胞计数、中性粒细胞计数、IL-6质量浓度、TNF-α质量浓度)、肺组织羟脯氨酸(HYP)含量、肺组织α-SMA免疫组化分析等指标.结果 (1)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组大鼠出现明显喘息气促、呼吸困难、爪唇紫绀、体重下降、死亡率增加的现象;(2)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组大鼠W/D值、肺系数显著增高,并出现急性肺水肿,其中LPS-mid组与BLM组表现较为一致(P＞0.05);(3)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组组织病理学改变符合该病经典病理表现;(4)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组肺CT有片状棉絮样阴影,兼有不规则密度增高影;(5)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组肺功能、血气分析结构呈下降趋势,其中LPS-mid组与BLM组表现较为一致(P＞0.05);(6)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组大鼠肺泡灌洗液中细胞总数计数、中性粒细胞计数增加,肺泡灌洗液TNF-α和血清IL-6质量浓度升高,其中LPS-mid组与BLM组表现较为一致(P＞0.05);(7)LPS-low组、LPS-mid组、LPS-high组大鼠肺组织HYP含量,α-SMA表达升高,其中LPS-mid组与BLM组表现较为一致(P＞0.05).结论 该方法可以成功诱导特发性肺纤维化急性加重大鼠动物模型,最优脂多糖用量为5 mg/mL,31 d为最佳观察时间点.