迷迭香酸甲酯通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨迷迭香酸甲酯(methyl rosmarinate,MR)诱导人肝癌细胞(HCC)Hep-3 B、SK-Hep1 凋亡的作用及其机制.方法 CCK-8 法检测各浓度 MR(0～200 μmol/L)对 Hep-3 B、SK-Hep1、MIHA细胞的增殖-毒性作用;光学显微镜观察不同浓度 MR处理三种细胞后的形态变化;EdU实验及流式细胞术分别检测 Hep-3 B、SK-Hep1 细胞增殖及凋亡情况;Transwell 迁移和侵袭实验检测MR对Hep-3B、SK-Hep1 细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blotting检测凋亡、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况.结果 不同浓度 MR(0～200 μmol/L)处理 Hep-3 B、SK-Hep1 细胞 48 h,其细胞活性呈浓度依赖性显著降低(P＜0.01),而对MIHA细胞活性无显著影响(P＞0.05),Hep-3 B、SK-Hep1 细胞 MR 的 IC50 分别为 102.5 μmol/L 和 99.3 μmol/L.MR(0～150 μmol/L)处理后显著抑制 Hep-3 B、SK-Hep1 细胞增殖(P＜0.05),通过光学显微镜观察到 Hep-3 B、SK-Hep1 贴壁细胞死亡脱落和细胞外形凹陷萎缩,而 MIHA细胞形态无明显改变.与对照组相比,100、150 μmol/L MR诱导 Hep-3 B、SK-Hep1 细胞凋亡,凋亡蛋白Bax和cleaved PARP的表达显著增加(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达显著下降(P＜0.05);且 HCC细胞的迁移和侵袭均被抑制,E-cadherin的表达显著增加,N-cadherin和 Vim-entin的表达降低(P＜0.05).Western blotting 检测结果显示,经 MR 处理的 Hep-3 B 和 SK-Hep1 的 p-Akt 和p-mTOR的表达显著降低且呈剂量依赖性,这提示MR可能通过抑制 Akt/mTOR信号通路发挥抗癌作用.结论 MR促进 Hep-3 B、SK-Hep1 细胞凋亡,其作用机制可能与抑制 Akt/mTOR信号通路有关.