香烟诱导支气管上皮细胞外泌体释放miR-34a靶向CASP2促进肺成纤维细胞增殖

目的:研究香烟模拟物(cigarette smoke extract,CES)通过调控16 HBE支气管上皮细胞中外泌体miR-34a的表达,从而影响MRC-5肺成纤维细胞的增殖.方法:从市售香烟中制备CES,后将6HBE细胞经过CES处理,收集上清中的外泌体miR-34a用于MRC-5细胞培养;使用RT-PCR检测外泌体miR-34a的表达水平;MRC-5细胞增殖能力通过细胞计数试剂盒CCK-8测定;通过Western blot检测CASP2的表达,利用双荧光素酶验证miR-34a与CASP2基因的靶向结合.结果:透射电镜下,16 HBE上清液中的外泌体呈球状,粒径在100 nm左右;经过CES处理后,外泌体miR-34a的表达显著增加.进一步研究表明,通过CES诱导的外泌体miR-34a能够促进MRC-5细胞的增殖;miR-34a与CASP2存在靶向结合关系;miR-34a mimic显著抑制了CASP2的表达.结论:在CES诱导的16HBE细胞中,外泌体miR-34a通过与CASP2基因的靶向结合,对成纤维细胞增殖起着关键作用.