基于μ阿片受体羧基端375STANT379磷酸化位点的多肽干预对吗啡介导的受体下游信号通路的影响

目的 探讨基于μ阿片受体(MOR)羧基端375 STANT379 磷酸化位点的多肽 TAT-Q368-T379 干预,对μ阿片受体下游信号通路的影响.方法 将 HA-MOR 质粒与 pGloSensorTM-22F 质粒共转染的 HEK-293 细胞分为空白组(A组)、DAMGO 组(B组)、吗啡组(C组)、0.5×10-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379 与吗啡联用组(D组)、10-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379 与吗啡联用组(E组)、2×10-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379 与吗啡联用组(F组),通过GloSensor cAMP生物传感器测定各组细胞中的cAMP含量.将MOR-C端标记Nanoluc的质粒以及β-arrestin2-N端标记 EYFP的质粒共转染完成的 HEK-293 细胞分为空白组(G 组)、DAMGO 组(H 组)、吗啡组(I组)、10-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379 与吗啡联用组(J 组)、3×10-5 mol/L Cmpd101 与吗啡联用组(K 组),通过蛋白质相互作用分析法测定各组细胞 MOR 激动后对β-arrestin2 的募集效应.将 HA-MOR 质粒转染完成的HEK-293 细胞分为空白组(L 组)、吗啡组(M组)、10-5 mol/L 多肽 TAT-Q368-T379 与吗啡联用组(N 组)以及3×10-5 mol/L Cmpd101 与吗啡联用组(O 组),通过细胞免疫荧光染色法检测各组细胞的受体平均荧光强度.结果 GloSensor cAMP生物传感器检测结果显示,C～F组细胞 EC50 值差异有显著性(F=13.12,P<0.05),其中D、E、F组 EC50 值较C组均显著减小(P<0.05).蛋白质相互作用分析法分析显示,I～K 组细胞 Emax值差异有显著性(F=185.95,P<0.05),其中J、K 组 Emax值较 I 组均显著减小(P<0.01).细胞免疫荧光染色法染色结果显示,L～O 组细胞表面受体荧光强度比较差异有显著性(F=17.46,P<0.05),其中与 M组比较,N、O 组细胞表面受体荧光强度均显著增高(P<0.01).结论 基于 MOR 羧基端375 STANT379 磷酸化位点设计的多肽 TAT-Q368-T379 可有效增强吗啡介导的 MOR下游 G蛋白信号通路的激活,减少吗啡介导的β-arrestin2 招募,从而减少由吗啡介导的 MOR的内吞.