二联PCR检测PPV和JEV混合感染的方法研究

本试验建立了一种同时检测猪细小病毒(PPV)和猪传染性乙型脑炎病毒(JEV)混合感染的二联PCR方法.采用Primer Premier5.0和Oligo6.0引物设计软件根据GenBank中 已 发 表 的PPV-VRI-1株(基因序列号AY390557)的NS1、JEV-WHe株(基因序列号为EF107523)的NS1基因序列设计了2对引物;分别扩增长度为750 bp、475 bp的特异性片段.通过对影响二联PCR的几个主要因素进行优化,初步建立了在同一反应体系中对这2个核酸片段进行有效扩增的二联PCR方法.敏感性试验表明,该方法最低能够检测到40.7 TCID50的PPV和15.5 TCID50的JEV.利用该方法对来自四川、重庆、广西、广东、福建等30个发病猪场的病料进行了检测,检测结果再与单项PCR方法检测结果相比较,两种方法平均符合率为100％.表明该方法是一种高度敏感、特异的检测方法,可以运用于临床检测.