牦牛ANXA5基因的克隆、序列分析及表达研究

为了深入地讨论牦牛ANXA5基因序列的特点,阐述其组织及细胞表达特性,通过采集牦牛不同组织样品,如心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、输卵管等,提取总RNA.采用PCR、生物信息学软件、实时荧光定量PCR、免疫组化等技术对牦牛ANXA5基因进行克隆、序列分析及表达特性研究.结果显示,牦牛ANXA5基因CDS区长为966 bp,共编码321个氨基酸.与黄牛比较,发现共有6个碱基突变存在于牦牛ANXA5基因中.黄牛与牦牛的核苷酸和氨基酸同源性大于99％,与其他哺乳动物进行氨基酸同源性比较,结果也均在90％以上,说明ANXA5基因在长期进化中保守.在牦牛的肺组织中,ANXA5基因表达量最高,与其他组织差异极显著(P<0.01);在子宫和输卵管组织中表达量次之.ANXA5在牦牛不同时期卵巢颗粒细胞中均有表达,且表达量随时间增长而逐渐升高.结果显示,培养72 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24,36 h颗粒细胞(P<0.01);培养48 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24 h颗粒细胞(P<0.01),显著高于培养36 h颗粒细胞(P<0.05),表明ANXA5在黄体化的颗粒细胞中表达量更高.然而,免疫组化结果显示,ANXA5的亚细胞定位于细胞质,在黄体细胞中表达较高.