黑龙江林蛙瘦素受体基因克隆及其在感染中的表达分析

黑龙江林蛙(Rana amurensis)在东北地区森林生态系统保护中发挥重要作用,同时又具有很高经济价值.瘦素受体(leptin receptor,LEPR)属于Ⅰ类细胞因子受体超家族成员,是调节能量代谢、调控免疫应答的关键因子.为研究LEPR基因在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)感染中的作用,利用RT-PCR方法克隆黑龙江林蛙LEPR完整编码区,并对序列进行生物信息学分析;构建Ah感染的黑龙江林蛙炎症模型,通过qRT-PCR、免疫组织化学染色和Western印迹等方法,对LEPR在生理状态下及感染状态下不同组织的表达进行动态检测.结果显示,LEPR基因读码框含3 408bp,共编码1 135个氨基酸,其在黑龙江林蛙多个组织中均有表达,心血管表达量最低.在Ah感染下心、肝、脾、肾、皮肤、肌肉和胃LEPR mRNA均在72 h达到表达量峰值(P＜0.05),肺组织在8 h达到峰值(P＜0.05).免疫组织化学和Western印迹显示,肝、脾、皮肤和胃之间LEPR表达量差异不显著(P＞0.05);脾和皮肤在不同感染时间表达量从高到低为:72 h＞对照＞36 h,胃在36 h表达量最低(P＜0.05).综上所述,本研究成功克隆了 LEPR基因,推断该基因参与了机体的感染过程,为进一步探究LEPR在两栖类的生物学功能奠定基础.