miR-376b-5p调控绵羊产羔性状相关基因IGF1的表达

为探讨miR-376b-5p靶向调控IGF1影响绵羊多羔性状的分子机制,本研究根据产羔记录选取高、低产羔数小尾寒羊各5只,同期发情处理后,采集卵泡期卵巢及其他6个组织,通过RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因检测系统分析miR-376b-5p与IGF1在高、低产羔数小尾寒羊各组织中的表达量;并确定二者之间的靶向关系;随后,将体外合成的miR-376b-5p模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染至绵羊卵巢颗粒细胞中,检测miR-376b-5p对IGF1表达水平的调控情况,同时对多羔性状TGF-β信号通路中TGFβ1和PTGS2标志因子的表达进行分析.结果表明:1)组织表达谱显示,IGF1在绵羊卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P＜0.05);RT-qPCR和Western blot显示,IGF1在高产羔数小尾寒羊卵巢组织中的表达量极显著高于低产羔数小尾寒羊(P＜0.01);miR-376b-5p定量结果显示其表达趋势与IGF1相反(P＜0.01);2)在线软件预测和双荧光素酶报告系统检测显示,miR-376b-5p可靶向结合IGF1 3'UTR序列;3)在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达miR-376b-5p后,IGF1蛋白和mRNA表达水平均显著下降(P＜0.05),而抑制miR-376b-5p后则相反,表明miR-376b-5p可显著抑制IGF1的表达;4)在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达miR-376b-5p后,TGF-β信号通路中TGFβ1、PTGS2的表达量均显著低于阴性对照组(P＜0.05).综上所述,在绵羊卵巢颗粒细胞中miR-376b-5p靶向结合IGF1 3'UTR区域,并通过抑制IGF1和TGF-β信号通路调控颗粒细胞增殖及绵羊繁殖,为进一步揭示绵羊多羔性状形成的分子机制及分子育种提供理论基础.