非洲猪瘟病毒抗体ELISA检测方法的建立及初步评价

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,分别用ASFV重组蛋白p30、p72、pA104R作为包被原建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,并进行初步评价.结果显示,ASFV重组蛋白p30、p72及pA104R分别按照25 ng/孔、50 ng/孔、50 ng/孔包被,血清样品均100倍稀释,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgG均20000倍稀释作为酶标试剂条件最优.p30-ELISA、p72-ELISA、pA104R-ELISA临界值分别为0.502、0.567、0.550.样品检测S/P值≥临界值判为阳性,否则判为阴性.3种方法分别检测梯度稀释的ASFV阳性血清、ASFV(CD2v缺失)阳性血清,p72-ELISA灵敏度最高,为1:64、1:128;3种方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒阳性血清各5份,ASFV阴性血清200份,结果均为阴性;3种方法批间、批内重复性变异系数均小于10％.说明建立的方法均可用于ASFV的血清学检测,为非洲猪瘟的防控提供了多样化的检测方法.