基于CD10+干细胞的诱导分化及人源抗体基因制备

目的:探讨体外CD10+干细胞与VSV病毒共培养分化后,能否从分化后细胞的基因组中扩增出成熟抗体IgG重链(VH)、轻链(VL)可变区基因片段.方法:37℃培养CD10+干细胞至单层细胞,B细胞扩增培养基及添加的白介素因子、VSV病毒与CD10+干细胞共培养15 d,留存每天细胞上清测定IgM含量,以15 d细胞为样本抽提总RNA,反转录为cDNA,以其为模板,用单链抗体(ScFv)噬菌体抗体库构建引物扩增VH、VL.结果:利用含VSV病毒、IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-21、CD40L的B细胞扩增培养基成功将CD10+干细胞分化为CD38、CD138阳性浆细胞,IgM含量随时间递减,诱导15 d后成功扩增出成熟抗体IgG的370 bp VH、320 bp VL可变区基因片段.结论:成功完成了基于CD10+干细胞的人源抗体基因获取,可用于各类人畜共患病病毒噬菌体抗体库构建.