FADS1基因对猪不饱和脂肪酸含量的影响研究

[目的]研究脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturases 1,FADS1)基因对不饱和脂肪酸代谢的调控作用,为揭示其分子机制提供参考.[方法]利用PCR扩增猪FADS1基因的CDS区,将目的基因与pcDNA3.1(-)骨架载体连接获得重组表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,将重组表达载体瞬时转染宁乡猪肾成纤维细胞,转染后24、48 h分别收集细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测FADS1基因的表达情况,经过遗传霉素(geneticin,G418)筛选之后获得稳定表达FADS1基因的细胞系,命名为1-4#.利用甘油三酯检测试剂盒检测野生型和1-4#细胞甘油三酯含量变化;利用气相色谱质谱法(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)检测野生型和1-4#细胞不饱和脂肪酸含量变化情况.[结果]成功获得过表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,在转录水平和蛋白水平检测均有过表达效果.通过G418筛选出1株稳定过表达FADS1基因的单克隆细胞.甘油三酯含量测定结果显示,与野生型宁乡猪肾成纤维细胞相比,过表达FADS1的宁乡猪肾成纤维细胞中甘油三酯的含量显著降低(P＜0.05).不饱和脂肪酸检测结果显示,过表达FADS1后,总脂肪酸的含量极显著升高(P＜0.01),提高1.8倍,多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)中 ω-3 PUFA、ω-6 PUFA 含量均极显著升高(P＜0.01),二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid,DPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的相对含量极显著提高(P＜0.01),ω-3/ω-6值显著提高(P＜0.05).[结论]成功构建超表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADSl,并在宁乡猪肾成纤维细胞中成功筛选到了 1株稳定超表达 FADS1基因的单克隆细胞1-4#,经检测,FADS1基因超表达能显著降低细胞中甘油三酯含量、提高ω-3 PUFA含量及占比,提高ω-3/ω-6值.