Forskolin对小鼠CD8+记忆T细胞富集的影响

目的 探讨Forskolin对体外培养小鼠不同T细胞亚群的影响及对CD8+记忆T细胞的富集作用.方法 25只C57BL/6小鼠,采用密度梯度离心法分离脾脏淋巴细胞,应用CD3+T细胞分离试剂盒分选CD3+T细胞,经体外培养后分为对照组和 5、10、20 μmol/L Forskolin 组,5、10、20 μmol/L Forskolin 组分别加入 5、10、20 μmol/L Forskolin,对照组加入等体积DMSO.采用台盼蓝染色法对4组总T细胞数进行计数,应用流式细胞仪检测4组CD8+记忆T细胞比率,选择与对照组差异最大的Forskolin浓度进行后续实验.采用液相色谱-质谱联用法分析对照组和20 μmol/L Forskolin组非靶向代谢组学,应用流式细胞仪检测对照组和20 μmol/L Forskolin组CD4+T细胞、CD8+T细胞比率及增殖活跃(低CFSE荧光强度)的CD8+记忆、非记忆T细胞比率,计算增殖活跃的CD8+记忆与非记忆T细胞比值(CD8+记忆/非记忆 T 细胞).结果 对照组和 5、10、20 μmol/L Forskolin 组总 T 细胞数[(102.91±2.91)％、(69.84±6.88)％、(31.61±2.52)％、(14.02±2.12)％]依次降低(P＜0.05);5、10、20 μmol/L Forskolin 组 CD8+记忆 T 细胞比率[(23.03±12.06)％、(31.58±10.39)％、(44.35±9.10)％]依次升高(P＜0.05),对照组[(22.58±6.33)％]与5μmol/L Forskolin组比较差异无统计学意义(P＞0.05);选择与对照组差异最大的20 μmol/L Forskolin组进行后续实验.对照组与20 μmol/L Forskolin组差异代谢物有123种,主成分分析显示2组细胞代谢特征存在差异,20 μmol/L Forskolin组三羧酸循环代谢物焦磷酸硫胺素、琥珀酸酯水平均低于对照组(P＜0.05),脂肪酸代谢物十六烯酸、鞘磷脂、1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油、二十碳二烯酸水平均高于对照组(P＜0.05),糖酵解代谢物α-D-葡萄糖1-磷酸、2-脱氧-D-葡萄糖6-磷酸水平与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).20 μmol/L Forskolin组CD8+T细胞比率[(91.24±3.71)％]高于对照组[(81.14±9.22)％](t=9.297,P=0.008),CD4+T 细胞比率[(0.57±0.45)％]低于对照组[(8.33±6.58)％]](t=12.449,P=0.003).20 μmol/L Forskolin 组增殖活跃的 CD8+记忆 T 细胞比率[(37.50±1.15)％]高于CD8+非记忆T细胞[(6.46±0.75)％](t=72.779,P＜0.001),对照组增殖活跃的CD8+记忆T细胞比率[(49.73±2.40)％]低于 CD8+非记忆 T 细胞[(70.90±1.39)％](t=19.289,P＜0.001);20 μmol/L Forskolin 组增殖活跃的CD8+记忆、非记忆T细胞比率均低于对照组(t=7.956,P=0.001;t=70.692,P＜0.001),CD8+记忆/非记忆T细胞(5.84±0.50)高于对照组(0.70±0.22)(t=17.624,P＜0.001).结论 体外培养过程中Forskolin对小鼠不同T细胞亚群的增殖抑制存在差异,对CD4+T细胞的抑制强于CD8+T细胞,对CD8+非记忆T细胞的抑制强于CD8±记忆T细胞,添加Forskolin有助于CD8+记忆T细胞富集.