鹅4种常见病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立一种能快速检测鹅星状病毒(GoAstV)、鹅圆环病毒(GoCV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭坦布苏病毒(DT-MUV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank数据库已公布的GoAstV的ORF2基因、GoCV的Rep基因、GPV的VP3基因及DTMUV的NS5基因序列,分别设计4对特异性扩增引物,通过对扩增条件的优化及特异性、灵敏性的检验,建立了可同时检测以上4种病原的多重PCR检测方法,并对40份临床样品进行检测.结果显示,建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性和较高的灵敏性,可同时扩增出大小为731 bp(GoAstV)、543 bp(GoCV)、392 bp(GPV)、200 bp(DTMUV)的特异性片段,且利用本试验建立的多重PCR检测方法对水禽其他病原体进行扩增均呈阴性.该方法对GoAstV、GoCV、GPV及DTMUV最低检出限度分别为4X 103,4.22×103,4.43×103,4.73×103 copies/μL.单一 PCR检测方法对临床病料样品检测结果与多重PCR检测结果一致,证明该方法可用于这4种病原临床病料样品的检测.