氧糖剥夺影响人脐静脉内皮细胞紧密连接相关蛋白的机制研究

目的 探究氧糖剥夺影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)紧密连接相关蛋白的机制.方法 本实验时间为2021年5月至2022年1月.将HUVEC分为正常组、氧糖剥夺6 h组和氧糖剥夺24 h组.正常组HUVEC进行正常培养;氧糖剥夺6 h组HUVEC制备氧糖剥夺模型,并在缺氧培养箱中培养6 h;氧糖剥夺24 h组HUVEC制备氧糖剥夺模型,并在缺氧培养箱中培养24 h.在倒置显微镜下观察HUVEC的形态并拍照,采用CCK-8检测孵育1、2、3、4 d细胞增殖水平.将HUVEC分为氧糖剥夺组、空质粒组、排斥导向分子(RGM)a质粒敲减组.氧糖剥夺组HUVEC制备氧糖剥夺模型,并在缺氧培养箱中培养24 h;空质粒组HUVEC在氧糖剥夺组基础上,转染空载体;RGMa质粒敲减组HUVEC在氧糖剥夺组基础上,转染慢病毒.采用Western blot法检测RGMa、紧密连接相关蛋白(Claudin-5和ZO-1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、CDC42.结果 与正常组相比,氧糖剥夺6 h组、氧糖剥夺24 h组细胞体肿胀或变形,光晕消失,细胞边缘不清晰,细胞体内出现空泡,突起缩短,连接断裂,视野内颗粒样物质增多,细胞变形.孵育1、2、3、4 d,正常组和氧糖剥夺6 h组细胞增殖水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);孵育1、2、3、4 d,氧糖剥夺24 h组细胞增殖水平均低于正常组(P<0.05).空质粒组ZO-1、MMP-9低于氧糖剥夺组(P<0.05);RGMa质粒敲减组RGMa、ZO-1、CDC42低于氧糖剥夺组,Claudin-5、MMP-9高于氧糖剥夺组(P<0.05).结论 氧糖剥夺24 h可引起HUVEC增殖水平降低,氧糖剥夺引起HUVEC紧密连接相关蛋白改变的机制可能为RGMa通过CDC42而影响血脑屏障的紧密连接.