巨噬细胞胞外诱捕网诱导成纤维样滑膜细胞活化作用在类风湿关节炎发病中的机制

目的 研究巨噬细胞胞外诱捕网(METs)对成纤维样滑膜细胞(FLSs)的作用和相关机制.方法 采用人源单核细胞白血病细胞(THP-1)系体外诱导成巨噬细胞,分别使用脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-t)诱导METs形成.采用Sytox标记外泄的DNA水平;采用Western blot和免疫荧光法检测METs主要蛋白成分NE和MPO.纯化METs蛋白组分,将人FLSs细胞系分为对照组、METs组、C29组、IAXO-102组和C29+IAX0-102联合干预组,除对照组外,其余组均将纯化的METs蛋白组分加入FLSs培养液中,C29组同时加入Toll样受体(TLR)2抑制剂C29,IAX0-102组加入TLR4抑制剂IAXO-102,C29+IAXO-102联合干预组同时加入C29和IAX0-102.24 h后,检测FLSs细胞活力、迁移和侵袭能力.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)水平.结果 LPS诱导METs能力强于IFN-γ,差异有统计学意义(P＜0.05);METs蛋白可以显著增强FLSs细胞活力、滑膜细胞迁移和侵袭能力(P＜0.05);与对照组相比,METs蛋白处理组上清中IL-6、MMP-1、MMP-3和MMP-13升高,差异有统计学意义(P＜0.05).C29和IAXO-102单用或联用干预能显著降低滑膜细胞的活力、迁移和侵袭能力(P＜0.05);与METs组相比,C29+IAXO-102联合干预组上清中IL-6、MMP-1、MMP-3和MMP-13水平下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),且IAXO-102抑制能力强于C29(P＜0.05).结论 METs蛋白作为损伤相关模式分子主要通过活化TLR4来进一步激活FLSs,从而参与RA发病.