模拟失重下微血管内皮细胞通过外泌体转运miR-223-3p抑制成骨细胞分化的研究

目的 探究模拟失重下微血管内皮细胞通过外泌体转运miR-223-3p对成骨细胞分化的影响,为失重性骨质丢失的防治寻求干预靶点.方法 利用2D回转器对小鼠微血管内皮细胞进行模拟失重处理,采用低温超高速离心法提取细胞培养上清中的外泌体,对外泌体进行鉴定及摄取实验;向MC3T3-E1细胞中转染mimic-223-3p、inhibitor-223-3p及相应的阴性对照进行功能验证;向外泌体中电转mimic-223-3p﹑inhibitor-223-3p及相应的阴性对照后与MC3T3-E1细胞共培养.采用qRT-PCR检测miR-223-3p及碱性磷酸酶(ALP)、Runx2、Ocn的mRNA表达变化;采用Western blotting检测Runx2、Ocn的蛋白表达变化;采用ALP活性检测和ALP染色方法检测成骨细胞分化能力的变化.结果 模拟失重下微血管内皮细胞可分泌外泌体,外泌体与MC3T3-El细胞共培养后,可被成骨细胞摄入并导致细胞中miR-223-3p表达升高(P＜0.05);MC3T3-El细胞分别转染mimic-223-3p、inhibitor-223-3p后,过表达miR-223-3p能够显著抑制成骨细胞分化(P＜0.05,P＜0.01),抑制miR-223-3p能够显著促进成骨细胞分化(P＜0.05,P＜0.01);ConExos电转mimic-223-3p后与MC3T3-El细胞共培养,可显著抑制成骨细胞分化(P＜0.05,P＜0.01);Clino Exos电转inhibitor-223-3p后与MC3T3-El细胞共培养,可显著缓解模拟失重下微血管内皮细胞源外泌体对成骨细胞分化的抑制(P＜0.05,P＜0.01).结论 模拟失重下微血管内皮细胞可通过外泌体转运miR-223-3p,增加成骨细胞中miR-223-3p表达,进而抑制成骨细胞分化,提示miR-223-3p可以作为潜在的干预靶点.