穿心莲ent-柯巴基焦磷酸合酶基因的克隆及其功能分析

目的：穿心莲内酯类成分是穿心莲的主要药效活性成分。二萜合酶--ent -柯巴基焦磷酸合酶（ent-copalyl diphosphate synthase，简称CPS）是穿心莲内酯生物合成途径的第一个关键限速酶。本论文的目的是克隆穿心莲CPS的编码基因，并进行序列分析。方法：通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增的技术从穿心莲叶片中获得目的基因；并利用生物信息学的方法对其编码蛋白进行功能分析。结果：获得了全长2499bp的cDNA序列，编码一个833aa的蛋白。序列同源性比较表明，该蛋白与野甘草、咖啡等其它植物来源的CPS具有较高的同源性。保守功能结构域分析显示，该蛋白包含一个富含Asp残基的植物萜类合酶的共有保守功能域"DXDD"，归属于萜类生物合成酶I类超级家族和顺式聚异戊二烯焦磷酸合酶超级家族。结论：初步推测克隆得到了穿心莲CPS的编码基因（命名为ApCPS，GenBank登录号为：JN216843.1），为下一步功能鉴定及探讨其在穿心莲内酯生物合成中的作用奠定了基础。