miR-32-5p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-32-5p对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的作用及机制,以及与含硬化蛋白结构域蛋白1(sclerostin domain-containing protein 1,SOSTDC1)的关系.方法 通过R语言分析筛出相比于正常胃组织,胃癌组织中有2倍以上表达差异的所有miRNA,同时预测差异2倍以上miRNA的靶基因,在其中确定研究目标miR-32-5p及SOSTDC1.采用qRT-PCR研究胃上皮细胞(GES-1)及胃癌细胞(MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-45)中miR-32-5p的表达水平.对MKN-45细胞进行转染,使其分为miR-NC mimics组(Lipofectamine 2000与miR-NC mimics共同转染)、miR-32-5 p mimics组(Lipofectamine 2000与miR-32-5 p mimics共同转染)、miR-NC inhibitor组(Lipofectamine 2000与miR-NC inhibitor共同转染)、miR-32-5 p inhibitor组(Lipofectamine 2000与miR-32-5 p inhibitor共同转染).通过qRT-PCR检测过表达和敲除转染效率.通过集落克隆实验及CCK-8实验检测细胞增殖.采用流式细胞术检测细胞凋亡.通过Western blot实验检测miR-32-5 p对凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、p-GSK3β)的影响.利用基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)网站分析胃癌组织中SOSTDC1的表达情况.TargetScan则用于分析miR-32-5p与SOSTDC1之间的调控关系.通过Western blot实验检测miR-32-5p对SOSTDC1蛋白的影响.结果 miR-32-5p在胃癌组织中高表达,与正常胃组织相比具有2倍以上表达差异(P<0.05),且miR-32-5p与SOSTDC1呈靶向关系.与胃上皮细胞GES-1相比,miR-32-5p在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-45中显著高表达(P<0.05).miR-32-5p mimics组细胞中miR-32-5p的表达相比于miR-NC mimics组增加(P<0.05);miR-32-5p inhibitor组细胞内miR-32-5p的表达水平则较miR-NC inhibitor组下降(P<0.05).miR-32-5p mimics组细胞增殖能力与miR-NC mimics组相比增强(P<0.05);miR-32-5p inhibitor组细胞增殖能力则较miR-NC inhibitor组下降(P<0.05).miR-32-5p mimics组细胞凋亡率较miR-NC mimics组下降(P<0.05);miR-32-5p inhibitor组细胞凋亡率则较miR-NC inhibitor组升高(P<0.05).与miR-NC mimics组相比,miR-32-5p mimics组Bcl-2、β-catenin、p-GSK3β的蛋白表达水平升高,而Bax、cleaved-Caspase-3的蛋白水平下降(P<0.05);与miR-NC inhibitor组相比,miR-32-5p inhibitor组Bcl-2、β-catenin、p-GSK3β的蛋白表达下降,而Bax、cleaved-Caspase-3的蛋白表达上升(P<0.05).与正常胃组织相比,SOSTDC1在胃癌组织中低表达(P<0.05).miR-32-5p与其下游靶基因SOSTDC1相互结合.与miR-NC mimics组相比,miR-32-5p mimics组SOSTDC1的表达下降(P<0.05);而与miR-NC inhibitor组相比,miR-32-5p inhibitor组SOSTDC1表达增加(P<0.05).结论 miR-32-5p在胃癌细胞中通过抑制SOSTDC1的表达介导Wnt/β-catenin通路的激活而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡.