含内参靶标的禽败血支原体和滑液支原体多重荧光PCR检测方法研究
China Port Science and Technology（2022）
摘要
在序列比对分析的基础上,分别针对禽败血支原体脂蛋白基因、滑液支原体16S rRNA基因以及β-actin(内参)设计3对引物和3条探针,经体系优化建立了可快速鉴别检测2种禽类最重要的支原体(禽败血支原体和滑液支原体)的多重荧光PCR检测方法.经概率回归分析显示,该方法可分别检出4.48和4.89基因拷贝的DNA,且不与其他禽病病原发生交叉反应.应用建立的荧光PCR检测方法,对送检的358份拭子进行检测,检出败血支原体阳性6份,滑液支原体阳性2份,与OIE推荐的常规PCR方法结果一致.本研究建立的含内参靶标的多重荧光PCR方法不仅特异性强、灵敏度高,而且可对采样和检测全过程进行质控,可用于禽败血支原体和滑液支原体的快速筛查.
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关键词
internal amplification control,Mycoplasma gallisepticum,Mycoplasma synoviae,multiplex fluorescence PCR
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