抗大鼠Nogo-A-△2特异性多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备特异性兔抗大鼠轴索过度生长抑制因子A(Nogo-A)氨基端序列aa1～172(Nogo-A-△2)抗体,并鉴定抗体特性.方法 利用原核表达系统获得Nogo-A-△2(NA2)蛋白,以NA2纯蛋白为抗原免疫大耳白兔,同时NA2偶联N-羟基琥珀酰亚胺活化后的琼脂糖凝胶,偶联NA2抗原的凝胶进行免疫后大鼠血清的纯化,获得兔抗NA2抗体;ELISA检测纯化抗体的效价,Western blotting分析抗体的特异性.结果 构建pET-24a-NA2表达载体,经大肠杆菌(Escherichia coli,E coli)原核表达及Ni柱亲和纯化得到用于免疫的NA2纯蛋白,免疫大耳白兔获得抗血清后,利用偶联NA2蛋白的琼脂糖亲和填料对免疫血清进行特异性亲和纯化,获得效价高(1∶1×106)、特异性好的兔抗大鼠NA2特异性抗体.结论 本研究成功制备了能够识别NA2结构域的特异性兔多抗.