六味地黄方含药血清对H2O2诱导的氧化损伤MC3T3?E1细胞Runx2、OPG/RANKL的干预作用及其机制探讨

目的 观察六味地黄方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)Runt相关转录因子2(Runx2)及护骨素/核因子-κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)的干预作用,并从抗氧化角度初步探讨其作用机制.方法 制作六味地黄方汤剂,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄方含药血清.除正常组外,其余各组先用1.0 mmol/L H2O2预处理MC3T3-E1细胞6 h,随后模型组更换正常培养基,N-乙酰半胱氨酸(NAC)组更换含有2.5 mmol/L NAC的培养基,六味地黄方含药血清组更换含有10％药物血清的培养基,各组均处理24 h.采用DCFH-DA荧光探针检测MC3T3-E1细胞内活性氧(ROS)水平.根据试剂盒说明书检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(GSH).采用Western blot法检测Runx2、OPG、RANKL、肿瘤抑制蛋白P53及磷酸化状态的P53蛋白(p-P53)表达.结果 与正常组比较,模型组ROS明显升高(P<0.05),同时CAT、SOD、GSH-PX、GSH均明显降低(P<0.05);在蛋白表达方面,与正常组相比,模型组Runx2、OPG蛋白表达均明显降低(P<0.05),RANKL蛋白表达明显升高(P<0.05),同时p-P53/P53也有明显升高(P<0.05).与模型组相比,六味地黄方含药血清组GSH明显升高(P<0.05),ROS水平明显下降(P<0.05).在蛋白表达方面,与模型组比较,六味地黄方含药血清组Runx2、OPG蛋白表达均明显升高(P<0.05),RANKL蛋白表达明显降低(P<0.05),同时p-P53/P53明显降低(P<0.05).结论 六味地黄方含药血清能促进H2O2致氧化损伤MC3T3-E1细胞内Runx2蛋白表达,升高OPG蛋白表达,降低RANKL蛋白表达,这可能与其升高GSH的含量、抑制P53蛋白的磷酸化,进而降低细胞内ROS水平有关.