重组人Jagged2胞外区蛋白的真核表达与免疫原性鉴定

本研究目的在于使用哺乳动物真核表达系统获得具有高免疫原性重组人Jagged2胞外区C2-EGF2区段(aa27～309),为后续抗Jagged2抗体相关研究奠定基础.首先,合成JAG2胞外区基因并插入pcDNA3.1(+)质粒构建哺乳细胞真核表达载体.使用阳离子脂质体转染试剂瞬时转染HEK293F细胞,收集培养上清,使用镍离子亲和层析柱梯度洗脱纯化,纯化后蛋白样品经过12％胶浓度SDS-PAGE电泳,免疫Balb/c小鼠并利用间接ELISA法测试小鼠抗血清效价.结果显示,150 mmol/L咪唑浓度下洗脱出的Jagged2蛋白在相对分子质量35 000左右出现单一电泳条带,ImageJ分析纯度达90％以上.3次免疫后小鼠产生的抗血清效价最高可达106以上.此结果表明真核表达得到的Jagged2胞外区蛋白具有较高的纯度和免疫原性,可以作为免疫原蛋白支持后续的抗体筛选.