川芎嗪对脂肪干细胞体外增殖及小鼠颗粒脂肪移植存活的影响

目的 探讨川芎嗪对脂肪干细胞(ADSC)体外增殖,以及添加川芎嗪对小鼠颗粒脂肪移植物存活的影响.方法 将ADSC分组干预,分为ADSC组、ADSC-透明质酸(HA)组(0.2 ml ADSC+0.2 ml HA)、ADSC-HA+川芎嗪组(0.2 ml ADSC+0.2 ml HA+0.1 mg/ml川芎嗪),分别于培养的第1、3、5、7天,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力.将12只裸鼠按随机数字表法分为颗粒脂肪-HA+PBS组(200μl PBS+颗粒脂肪+200μl HA)、颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组(200μl PBS+颗粒脂肪+200μl HA+术后川芎嗪注射)、颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组(200μl 100 mg/L的川芎嗪+颗粒脂肪+200μl HA)、颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射+浸泡组(200μl 100 mg/L的川芎嗪+颗粒脂肪+200μl HA+术后川芎嗪注射),各3只.使用1 ml注射器将各组混合物注射到裸鼠左右背部皮下,每点注射0.4 ml.术后川芎嗪注射是在皮下注射颗粒脂肪后,以2 mg/d的剂量注射川芎嗪,持续注射7 d.术后8周处死裸鼠解剖刮取出移植组织.组织学HE染色、油红O染色观察各组裸鼠颗粒脂肪移植组织切片.荧光定量PCR法检测各组脂肪形成相关转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和CCAAT增强结合蛋白α(C/EBP-α)mRNA表达水平;透射电子显微镜下观察组织HA残留情况.结果 培养第7天时,ADSC-HA+川芎嗪组细胞增殖能力较ADSC组、ADSC-HA组增强(均P<0.05),而ADSC组、ADSC-HA组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05).与颗粒脂肪-HA+PBS组相比,颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组和颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组裸鼠皮下颗粒脂肪移植物重量较重(均P<0.05).颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射+浸泡组裸鼠皮下颗粒脂肪移植物重量较颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组、颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组更重(均P<0.05),而颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组与颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组比较差异无统计学意义(P>0.05).组织学染色显示,颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组与颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组颗粒脂肪移植组织脂肪细胞数量增多,零散分布,而颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射+浸泡组脂肪细胞明显增多且排列紧密.与颗粒脂肪-HA+PBS组相比,颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组、颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组、颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射+浸泡组裸鼠颗粒脂肪移植组织PPAR-γ、C/EBP-αmRNA表达水平均升高(均P<0.05),且颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射+浸泡组高于颗粒脂肪-HA+川芎嗪注射组、颗粒脂肪-HA+川芎嗪浸泡组(均P<0.05).各组移植组织透射电镜下扫描均未检测到HA残留.结论 川芎嗪可促进ADSC体外增殖能力.川芎嗪可能通过促进脂肪形成相关转录因子PPAR-γ和C/EBP-α的表达促进体内颗粒脂肪移植物的存活和脂肪细胞形成.单纯注射或浸泡川芎嗪两种方式对移植脂肪的生长影响差异不大,同时进行两种方式给药更能促进脂肪细胞形成.