二甲双胍增强胆管癌细胞对吉西他滨敏感性机制的研究

目的 探讨二甲双胍通过抑制丙酮酸激酶M2(PKM2)促进线粒体凋亡增强胆管癌细胞对吉西他滨敏感性的作用及机制.方法 将二甲双胍及吉西他滨和PKM2激动剂ML265不同组合后作用于人胆管癌细胞HCC9810和RBE:(1)HCC9810/RBE+溶剂组:HCC9810/RBE细胞在含有终浓度5％二甲基亚砜(DMSO)的培养基中培养;(2)HCC9810/RBE+吉西他滨组:HCC9810/RBE细胞在含有终浓度为100 nmol/L吉西他滨(溶于5％DMSO)的培养基中培养;(3)HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组:HCC9810/RBE细胞在含有终浓度为10 mmol/L二甲双胍和100 nmol/L吉西他滨(溶于5％DMSO)的培养基中培养;(4)HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨+ML265组:HCC9810/RBE细胞在含有终浓度为10 mmol/L二甲双胍、100 nmol/L吉西他滨和100 nmol/L ML265(溶于5％DMSO)的培养基中培养.48 h后采用噻唑蓝染色法检测各组细胞存活率,qRT-PCR法检测各组细胞PKM2 mRNA表达水平,乳酸定量检测试剂盒检测各组细胞培养基乳酸含量,乳酸脱氢酶(LDH)定量检测试剂盒检测各组细胞LDH活性;线粒体膜电位检测染色法检测各组细胞线粒体凋亡情况.结果 与HCC9810/RBE+溶剂组比较,HCC9810/RBE+吉西他滨组、HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组、HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨+ML265组细胞存活率均降低而线粒体凋亡均增加,HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组、HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨+ML265组细胞培养基乳酸含量、PKM2 mRNA表达水平均降低,细胞LDH活性均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与HCC9810/RBE+吉西他滨组比较,HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组细胞存活率降低,HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组、HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨+ML265组细胞培养基乳酸含量、PKM2 mRNA表达水平均降低而线粒体凋亡均增加、细胞LDH活性均增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);与HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨组细胞比较,HCC9810/RBE+二甲双胍+吉西他滨+ML265组细胞存活率、PKM2 mRNA表达水平均升高而线粒体凋亡、细胞LDH活性均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 二甲双胍可能通过抑制胆管癌细胞PKM2的表达、激活线粒体凋亡来增强胆管癌细胞对吉西他滨的敏感性.