微小RNA-155-5p通过靶向BTB-CNC异体同源体1促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应

目的:观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p通过靶向BTB-CNC异体同源体1(BACH1)促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应，从而参与尿道狭窄的发生和发展。方法:生信分析结果BACH1可能是miR-155-5p的直接靶标，然后将miR-155-5p mimics或mimics NC与pmiR-Glo-BACH1-WT或pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染到SV-HUC-1细胞中，转染48 h后，检测荧光素酶活性。将BACH1小干扰RNA(siRNA)转染到SV-HUC-1细胞中，pcDNA3.1-BACH1转染到SV-HUC-1细胞中。转染24 h后，用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(collagen IV)的信使核糖核酸(mRNA)水平，同时应用蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGF、FN和Collagen Ⅳ的蛋白质水平。两组间分析采用单因素方差分析。结果:miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-WT共转染的细胞，与miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染的细胞比较的荧光活性明显下降(FLUCR与RLUCR比率为0.54±0.05比0.95±0.07， F＝73.65， P<0.05)。然而，无论转染pmiR-Glo-BACH1-MUT或pmiR-Glo-BACH1-WT，模拟对照细胞中的荧光强度都无明显变化(比率为1.03±0.04比1.01±0.03 F＝0.548， P>0.05)。IL-1β、IL-6和TNF-α水平在BACH1敲低细胞中增加(分别为615.57±29.44比285.37±23.97， F＝226.939；818.53±41.16比502.63±24.38， F＝130.824；596.63±41.16比366.57±28.84， F＝88.349)， P<0.01，但在BACH1过表达细胞中下降(分别为122.70±15.94比298.87±12.44， F＝227.675；282.50±33.16比511.30±39.76， F＝58.585；129.83±9.31比374.80±25.40， F＝245.926， P<0.01)。此外，VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(分别为1.65±0.08比0.96±0.06， F＝149.555；2.00±0.12比0.97±0.07， F＝160.243；1.65±0.06比0.96±0.02， F＝369.388， P<0.01)和蛋白质水平(分别为1.50±0.10比1.01±0.09， F＝38.382；1.42±0.10比0.99±0.09， F＝31.339；1.30±0.06比0.95±0.05， F＝62.642， P<0.01)也因BACH1敲低而增加，但因SV-HUC-1细胞中BACH1过表达而下降(mRNA水平分别为0.39±0.04比0.97±0.04， F＝340.18；0.52±0.04比0.94±0.03， F＝204.165；0.43±0.01比1.03±0.11， F＝47.206；蛋白水平分别为0.42±0.08比0.97±0.12， F＝45.375；0.52±0.05比0.96±0.12， F＝33.781；0.58±0.05比0.99±0.11， F＝36.900， P<0.01)。 结论:miR-155-5p通过靶向BACH1促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应。