副猪嗜血杆菌体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞对炎性因子和m6A相关基因表达的影响

为了研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)血清5型刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞对炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8),以及m6A甲基化修饰相关基因METTL3、METTL14、WTAP、YTHDF2和FTO表达的影响,试验构建了 Hps感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞模型,利用不同浓度的Hps(MOI分别为10∶1和100∶1)分别感染细胞0,6,12,24 h,收集各时间点细胞样品的总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量PCR方法检测炎性因子及m6A修饰关键基因表达水平的变化情况.结果表明:当MOI为10∶1和100∶1时,TNF-α和IL-8基因总体呈上调表达,在Hps刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞24小时时均达到显著水平(P＜0.05);在12小时时,除MOI为100∶1时的TNF-α基因外均达到显著水平(P＜0.05),即Hps感染3D4/21猪肺泡巨噬细胞模型构建成功.在Hps刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞后m6A修饰关键基因METTL3、METTL14、WTAP、YTHDF2和FTO基因均呈下调表达,当MOI为10∶1时,在刺激6,12,24小时时METTL3、WTAP、YTHDF2基因达到显著水平(P＜0.05),在刺激12,24小时时METTL14基因达到显著水平(P＜0.05),FTO基因在刺激6,24小时时达到显著水平(P＜0.05);当MOI为100∶1时,在刺激6,12,24小时时METTL3、METTL14、WTAP、YTHDF2和FTO基因均达到显著水平(P＜0.05).说明Hps刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞系能够抑制m6A甲基化修饰相关基因的表达,并可能在m6A甲基化修饰过程中起到调控作用.