短梗五加多糖的提取分离与体外活性研究

目的:提取分离短梗五加多糖组分,并体外评价其生物活性.方法:水提醇沉法提取短梗五加粗多糖(ASP),离子交换色谱柱(DEAE-52)分离,苯酚-硫酸法、间羟基联笨法、考马斯亮蓝法测定其总糖、糖醛酸、蛋白质含量,高效液相色谱法(HPLC)分析单糖组成.噻唑蓝比色法(MTT)检测淋巴细胞的增殖,中性红比色法检测巨噬细胞的吞噬,硝酸还原酶法(Griess)和酶联免疫法(ELISA)检测一氧化氮(NO)释放和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌,以评价其免疫调节作用;采用心肌细胞(H9c2)缺氧复氧(H/R)损伤模型,评估其对H9c2细胞H/R损伤的保护作用及机制.结果:ASP经分离得到中性多糖(ASP-Ⅰ,由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,摩尔比为1∶6.63∶2.72∶0.88)和酸性多糖(ASP-Ⅱ,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,摩尔比为1∶2.28∶4.30∶1.18∶2.82∶2.81).ASP-Ⅰ和ASP-Ⅱ的总糖、糖醛酸、蛋白质含量分数分别为87.61％,0,0.82％和72.33％,19.71％,0.36％.与空白对照组、刀豆蛋白(ConA)组、脂多糖(LPS)组相比,短梗五加多糖50μg/mL～200μg/mL各组可单独及协同ConA、LPS促进淋巴细胞的增殖.与空白对照组相比,短梗五加多糖50μg/mL～200μg/mL各组可促进淋巴细胞的增殖、增强巨噬细胞的吞噬,促进NO的释放和TNF-α的分泌.与模型对照组相比,短梗五加多糖50μg/mL～100μg/mL各组可抑制H9c2细胞H/R损伤模型中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力、丙二醛(MDA)含量、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)蛋白表达的升高,促进超氧化物歧化酶(SOD)活力升高;上调微小RNA451(micro RNA451)表达,下调高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)表达.结论:短梗五加多糖具有免疫调节及保护H9c2细胞H/R损伤的作用,H9c2细胞H/R损伤与micro RNA 451/HMBG1表达有关.