仿刺参IKKβ基因(AjIKKβ)cDNA克隆、表达模式分析及其免疫功能研究

为了明确仿刺参(Apostichopus japonicus) IκB [Inhibitor of nuclear factor kappa-B (NF-κB)]激酶(IKK)基因的序列及分子进化信息,掌握仿刺参中该基因的组织表达规律及其对海参致病菌的响应规律.本研究利用转录组数据库挖掘和cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次获得仿刺参IKKβ基因(命名为AjIKKβ)的全长cDNA序列.结果 表明,仿刺参AjIKKβ基因的cDNA全长为2 854bp,其中5'非编码区长度为159 bp,3'非编码区长度为331 bp,开放阅读框(ORE)长度为2 364 bp,共编码787个氨基酸.生物信息预测显示AjIKKβ蛋白的相对分子量为89.6 kD,理论等电点为6.83.同源性及系统进化分析结果显示,仿刺参与其它6种海洋生物IKKβ蛋白序列的相似性为51.37％,具有一定的保守性.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测发现,AjIKKβ基因在仿刺参管足,体腔液,呼吸树,肠,体壁和纵肌6种组织中均有表达,其相对表达量从高到低依次为体腔液＞呼吸树＞管足＞肠＞纵肌＞体壁,且具有鲜明的组织特异性.利用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)进行感染实验,发现,与未感染致病菌的对照组相比,致病菌感染组仿刺参体腔细胞中AjIKKβ的相对表达量在感染后的4h、8h、24 h、48 h和72 h均呈现显著的上调趋势(p＜0.05),提示AjIKKβ基因在仿刺参免疫防御中发挥重要作用.本研究结果不仅丰富了棘皮动物IKKβ基因的序列和结构信息,更为初步了解棘皮动物IKKβ基因的免疫调控功能提供基础数据.