马拉龙和阿托伐醌+阿奇霉素在不同免疫状态小鼠体内的抗田鼠巴贝虫药效评价

目的 以免疫状态正常的BALB/c小鼠及非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷NOD/SCID小鼠为模型,对临床较常用的阿托伐醌(ATQ)+阿奇霉素(AZM)和马拉龙进行抗田鼠巴贝虫体内药效评价.方法 取69只BALB/c健康小鼠与15只NOD/SCID健康小鼠,每鼠接种107个感染田鼠巴贝虫的鼠红细胞.2种小鼠感染后均设置3个组,即ATQ+ AZM组(195 mg/kg ATQ+ 32.5 mg/kg AZM)、马拉龙组(62.5 mg/kg ATQ+ 25 mg/kg氯胍,即1/4片)和对照组(5％可溶性淀粉溶液),每鼠按0.2 ml/109灌胃给药.BALB/c小鼠药物抑制试验中(2个用药组各12只,对照组15只),小鼠感染后4h开始用药,连用10 d,每组于感染后1、3、5、7、10d喂药前,随机取3只小鼠尾尖采血,采用薄血膜涂片染色镜检观察红细胞感染情况并计算红细胞染虫率(EIR),qPCR检测18S rRNA基因相对量.BALB/c小鼠药物治疗试验中(3组各10只),于感染后7d取所有小鼠尾尖血制薄血膜染色镜检,确认感染后开始用药,连用10d,于感染后7、10、11、12、13、15、17、19、24、27 d均采血镜检并计算EIR;于感染后27 d,每组随机取5只小鼠,采用免疫抑制剂地塞米松磷酸钠注射液(200 μl/鼠),连续腹腔注射7d,自免疫抑制后3d起,每天采血制薄血膜涂片染色镜检,观察复燃情况;于感染后27 d,每组随机取5只小鼠采眶窦血,将抗凝全血混匀后腹腔注射接种对应的3组健康BALB/c小鼠(每组5只),继代接种感染后7～10 d,制薄血膜涂片染色镜检并计算EIR.NOD/SCID小鼠(3组各5只)于感染后10 d开始用药,连用10d,于感染后10、12、15、17、19、21、24、27、29、31、35、42、49 d,分别取3组小鼠尾尖血,采用薄血膜涂片染色镜检并计算EIR.应用GraphPad Prism 8对数据进行统计学分析.结果 BALB/c小鼠药物抑制试验结果显示,ATQ+ AZM及马拉龙均可有效抑制小鼠虫血症.镜检结果显示,ATQ+ AZM组在感染后3d、5d,均仅1只小鼠查见虫体,EIR分别为(0.20±0.12)％和(0.30±0.17)％,感染后7d(用药第8天),EIR降为0;马拉龙组小鼠EIR一直为0;对照组与ATQ+AZM组、马拉龙组EIR的差异均有统计学意义(F=151.6、153.5,P＜0.05).qPCR检测结果显示,感染后7d,马拉龙组、ATQ+AZM组的18S rRNA基因相对量分别为0.0102±0.0012、0.0078±0.0066,均与对照组(68.1438±79.1229)差异有统计学意义(F=7.376、7.382,P＜0.05);感染后10 d(停药第1天),马拉龙组、ATQ+AZM组的18S rRNA基因相对量分别降为0.0017±0.0009、0.0008±0.0006,均与对照组(18.3099±7.4986)差异有统计学意义(t=4.229、4.229,P＜ 0.05).BALB/c小鼠药物治疗试验中,对照组、ATQ+ AZM组和马拉龙组的EIR均于感染后7d达峰值,分别为(36.67±10.85)％、 (35.30±6.46)％和(33.53±7.37)％;感染后11d(用药第5天),EIR分别降为(10.47±8.02)％、(1.53±0.31)％和(6.27±1.01)％;感染后15d,各组EIR逐渐趋于0.免疫抑制剂复燃试验结果显示,免疫抑制后3d,对照组1只小鼠查见虫体;免疫抑制后5d起,ATQ+AZM组和马拉龙组小鼠均查见虫体,出现复燃.继代接种试验结果显示,继代接种感染后7d,ATQ+AZM组和马拉龙组均有3只受血鼠查见虫体;继代接种感染后9d,ATQ+ AZM组和马拉龙组分别有1只、2只受血鼠查见虫体;继代接种感染后10 d,ATQ+AZM组和马拉龙组受血鼠未查见虫体.ATQ+AZM组和马拉龙组NOD/SCID小鼠用药后,EIR均较快下降,从感染高峰(感染后10 d)的(59.90±0.10)％和(59.37±0.35)％降至感染后24 d的0,但分别于42 d、29 d又查见虫体;对照组小鼠感染后EIR在(47.20±0.80)％～(66.80±0.80)％波动,于感染后45 d全部死亡,与ATQ+AZM组、马拉龙组差异有统计学意义(F=5505、5984,P＜0.05).结论 临床常用的ATQ+ AZM和马拉龙对感染小鼠体内的田鼠巴贝虫增殖有一定抑制作用,但均不能完全杀灭虫体;治疗后血液仍具感染性,且在宿主免疫力低下至一定程度时虫体会复燃,呈较高红细胞染虫率.