慢病毒介导神经营养因子3基因修饰大鼠嗅鞘细胞的实验研究

目的:探究神经营养因子3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)分泌的NT-3在体内外的活性.方法:取SD大鼠胎鼠嗅球组织,进行原代培养、纯化和鉴定,将纯化后的OECs分为对照组(control)、空病毒感染组(Lenti-NC)以及Lenti-NT-3感染组(Lenti-NT-3)3组,分别在4～28 d,每隔4d应用酶联免疫分析方法(ELISA)测细胞培养上清中NT-3的浓度.并将NT-3基因修饰的OECs(NT-3-OECs)注入SD大鼠脑部,2周后进行脑组织石蜡切片p75神经生长因子受体(p75 NGFR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光检测,运用ELISA方法在4～16 d,每隔4d测各组大鼠脑组织中NT-3的浓度.结果:纯化后OECs纯度为(92.03±2.17)％;慢病毒对OECs的感染率为(70.69±10.29)％;各时间点Lenti-NT-3组上清中NT-3含量均显著高于Control组与Lenti-NC组(P＜0.05);NT-3-OECs移植入大鼠脑内2周后,可见p75 NGFR、GFAP表达阳性的OECs;各时间点Lenti-NT-3组脑组织中NT-3含量均显著高于Control组与Lenti-NC组(P＜0.05).结论:运用慢病毒载体构建的NT-3-OECs可在体内外高表达具有生物学活性的NT-3.