健脾清热活血方介导microRNA-222-3p调控TGF-β1、CDKN1B/p27表达防治结肠癌的离体研究

目的 通过检测健脾清热活血方基于microRNA-222-3p调控TGF-β通路对结肠癌HCT-116细胞迁移的变化以及TGF-β1、CDKN1B/p27的表达,探讨该方防治结肠癌的效用及可能机制.方法 参照血清药理学方法,制备大鼠含药血清.应用RNAi技术构建稳定沉默miR-222结肠癌HCT-116细胞系.离体实验随机分为空白对照组(HCT-116)、阴性对照组(NC)、阳性对照组(miR-222-3p沉默)、治疗组(miR-222-3p沉默+低/中/高剂量中药).Tran-swell法检测细胞迁移能力,应用现代分子生物学技术检测TGF-β1、CDKN1B/p27表达.结果 成功构建TUD-hsa-miR-222-3p Inhibitor慢病毒载体并获得miR-222稳定沉默的结肠癌HCT-116细胞系,与正常组及NC组对比,miR-222沉默后HCT-116细胞迁移能力明显下降,有显著差异(P＜0.05);在治疗组中HCT-116细胞迁移数目较sh-miR222-3p组减少更为显著(P＜0.05).对于TGF-β1/CDKN1B/p27mRNA表达,与阳性对照组比较,治疗组CD-KN1B/p27mRNA表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05).WB结果显示,与阳性对照组相比,治疗组TGF-β1/CD-KN1B/p27蛋白表达均下调,有统计学意义(P＜0.05).结论 健脾清热活血方可能通过抑制miRNA-222-3p减少TGF-β1、CDKN1B/p27表达,降低细胞迁移能力,诱导结肠癌细胞凋亡,达到防治结肠癌的效用.