鸡白痢沙门氏菌PCR检测方法的建立

为建立鸡白痢沙门氏菌(S.Pullorum)的快速PCR检测方法,本研究通过比对S.Pullorum ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在S.Pullorum ATCC 9120株SEEP 011400～SEEP 011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并筛选了一对特异性引物,经反应条件的优化,建立了一种能够直接从鸡蛋样品中特异性检测S.Pullorum的PCR方法.并对该方法检测模拟鸡蛋样品的敏感性进行了评价,结果显示:该方法可以针对S.Pullorum特异性的扩增出576 bp的条带,而对其他常见致病性沙门氏菌血清型(31株)和非沙门氏菌(11株)均无扩增条带.该方法对S.Pullorum菌液检测的敏感性为102 cfu/mL,利用本研究建立的方法直接检测污染S.Pullorum的鸡蛋样品时的最低检测限为104 cfu/mL,且只需增菌8h后,即可检测到102 cfu/mL的S.Pullorum.利用该方法与其他PCR方法对模拟鸡蛋样品进行检测,对比检测结果,结果显示该方法敏感性为104 cfu/mL,高于其他PCR方法.利用该方法对229份临床样品进行检测,结果显示阳性检出率为3.06％(7/229),与其他检测方法结果相符.本研究建立的S.Pullorum鉴别检测方法具有较高的特异性与敏感性,并且能够快速检测出鸡蛋中的S.Pullorum,为S.Pullorum的检测提供了一种快速、有效的方法.