苦水玫瑰精油对B16细胞中黑色素合成的影响及机制研究

本文研究苦水玫瑰精油对小鼠B16黑素瘤细胞中黑色素合成的影响,并探讨其作用机制,为苦水玫瑰精油作为天然活性物质的开发应用提供实验依据.采用气相色谱与质谱联用技术(GC-MS)分析苦水玫瑰精油中的挥发性物质成分,研究对象为体外培养的小鼠B16细胞,构建α-黑素细胞刺激素(α-MSH)诱导的黑色素高表达细胞模型;经不同质量浓度的苦水玫瑰精油干预后,对B16细胞进行台盼蓝染色观察,采用CCK8法测定苦水玫瑰精油对黑色素细胞活力的影响;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和多巴氧化法分析B16细胞中的黑色素含量和酪氨酸酶(Tyr)活性的变化;利用质量浓度为2 g/L的苦水玫瑰精油分别处理B16细胞12,24和48 h,通过实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)以及蛋白免疫印迹检测(Western blot)实验测定B16细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的反应元件结合蛋白(CRE-binding protein,CREB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAP kinase,p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)与小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)的表达情况,探究苦水玫瑰精油对黑色素合成途径的影响.qRT-PCR实验结果显示,苦水玫瑰精油处理B16细胞48 h后细胞内MITF基因的表达被显著抑制,MITF基因的表达下调了76％,CREB,p38 MAPK的表达也被显著抑制,其中抑制率分别达到54％,41％,而ERK1与ERK2的表达随时间延长而逐渐升高;Western-blot实验也得到相似结果,CREB,p38 MAPK蛋白与磷酸化表达水平的变化趋势与MITF相一致,随着时间增加表达量随之减少,而ERK蛋白表达水平随着处理时间的增加而逐渐升高.表明苦水玫瑰精油可以通过抑制上述三条信号途径下调MITF的表达,从而减少细胞内黑色素含量.