白藜芦醇对苯并芘诱导小鼠大脑皮质神经元细胞线粒体损伤的拮抗作用

目的 探讨白藜芦醇(Resveratrol,RSV)拮抗苯并[a]芘(Benzo(a)pyrene,BaP)诱导神经元细胞线粒体损伤的分子机制.方法 将C57BL/6小鼠的大脑皮质神经元分别暴露于含终浓度为0(对照)、2、4μmol/L BaP的DMEM培养基中染毒24 h,同时,设置RSV对照组(20μmol/L的RSV处理6 h)和低浓度(10μmol/L RSV+4μmol/L BaP)和高浓度(20μmol/L RSV+4μmol/L BaP)RSV拮抗组(即RSV预处理6 h后,以4μmol/L BaP处理24 h).采用流式细胞术测定神经元细胞凋亡率,线粒体活性氧自由基(ROS)和膜电位;采用化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)值;采用Western blot法测定B淋巴细胞瘤相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、细胞色素C(Cyt-C)、自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)、PTEN基因诱导的假定激酶1(PINK1)和Parkin蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,各浓度BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元的存活率下降,而凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与4μmol/L BaP染毒组比较,各浓度RSV拮抗组小鼠大脑皮质神经元的存活率升高,细胞凋亡率下降,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,各浓度BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元Bax、Cyt-C蛋白的表达水平和Bax/Bcl-2值及4μmol/L BaP染毒组Bcl-2蛋白的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与4μmol/L BaP染毒组比较,各浓度RSV拮抗组小鼠大脑皮质神经元Bax、Bcl-2、Cyt-C蛋白的表达水平及Bax/Bcl-2值下降,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,各浓度BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元线粒体ROS水平均升高,而线粒体膜电位和ATP值均下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与4μmol/L BaP染毒组比较,各浓度RSV拮抗组小鼠大脑皮质神经元线粒体ROS水平均下降,而线粒体膜电位和ATP值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,2μmol/L BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元p62蛋白水平下降,而Beclin1,LC3Ⅱ蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与2μmol/L BaP染毒组相比,4μmol/L BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元p62蛋白水平升高,而Beclin1,LC3Ⅱ蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值均下降,差异均有统计学意义(P<0.05).与4μmol/L BaP染毒组比较,各浓度RSV拮抗组小鼠大脑皮质神经元p62蛋白的表达水平均下降,而Beclin1,LC3Ⅱ蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,2μmol/L BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元PINK1和Parkin蛋白的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与2μmol/L BaP染毒组比较,4μmol/L BaP染毒组小鼠大脑皮质神经元PINK1和Parkin蛋白的表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.05).与4μmol/L BaP染毒组比较,各浓度RSV拮抗组小鼠大脑皮质神经元PINK1和Parkin蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RSV通过活化线粒体自噬在BaP诱导的线粒体源性神经元损伤中发挥着重要的拮抗作用.