虫草素通过调控Gli1介导抗肝癌细胞增殖及促凋亡的机制

目的:探讨虫草素抑制人肝癌细胞增殖并促其凋亡的分子机制.方法:采用干扰小RNA(siRNA)技术沉默胶质肿瘤相关癌基因同源物1(Gli1)基因并转染SMMC-7721细胞,细胞增殖与活性检测(CCK-8)及细胞克隆实验检测细胞增殖能力;使用不同剂量的虫草素对肝癌细胞进行干预,检测肝癌细胞的增殖、凋亡情况.使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Gli1及其下游相关基因的表达情况.结果:与正常肝细胞比较,Gli1在SMMC-7721肝癌细胞中的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P＜0.01).CCK-8及克隆形成实验结果显示,与空白组比较,干扰沉默Gli1组SMMC-7721细胞72,96 h的增殖率降低(P＜0.05,P＜0.01);细胞集落形成能力显著降低(P＜0.01).虫草素干预后,与空白组比较,虫草素80,120 μmol· L-1组72,96 h肝癌细胞的增殖明显降低(P＜0.05,P＜0.01).凋亡实验结果显示,与空白组比较,虫草素80,120 μmol· L-1组SMMC-7721肝癌细胞凋亡显著增加(P＜0.01).Real-time PCR及Western blot实验显示,虫草素80,120 μmol·L-1组Gli1在SMMC7721细胞中的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);虫草素120 μmol· L-1组B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)和原癌基因(c-Myc) mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3) mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05).结论:Gli1在肝癌中高表达.虫草素可通过对Gli1及其下游与凋亡相关因子的调控从而抑制肝癌增殖并促肝癌细胞凋亡.