血清抗百日咳毒素中和抗体检测方法的建立及应用

目的 建立血清抗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)中和抗体的检测方法,并进行应用.方法 将不同浓度的PT蛋白(0.1～105.5 ng/mL)和105个/mL的CHO细胞悬浮液加入96孔板,均100 μL/孔,37℃孵育24 h,显微镜下观察细胞簇集程度,确定中和试验中PT的最适终浓度.将待检血清(1:4～1:4 096)及最适终浓度的PT加入96孔板,均50 μL/孔,37℃中和3 h;加入105个/mL的CHO细胞悬浮液,100μL/孔,继续培养24 h,镜下观察细胞簇集程度.用建立的方法检测8 份健康人血清样品的中和抗体含量,重复检测4次,计算变异系数(CV).采用PT-IgG抗体ELISA 试剂盒及建立的方法分别检测109份20～39 岁健康人群血清样本的PT-IgG抗体及PT 中和抗体水平,并分析两者的分布情况及相关性.结果 确定PT最适终浓度为0.84 ng/mL.8份血清样品重复检测4次的CV为0.00％～12.28％.109份健康人血清中和抗体效价分布范围为＜4～256,中位数为32,几何平均效价(GMT)为27.12(95％CI:20.78～35.39);PT-IgG 抗体分布范围为0.03～184.80 IU/mL,中位数为21.17 IU/mL,GMT为13.33 IU/mL(95％CI:9.95～17.87 IU/mL).PT-IgG IU/mL抗体浓度与中和抗体效价呈明显相关性(r = 0.77,P＜0.01),部分血清存在抗体浓度高,中和抗体效价低的现象.结论 成功建立了血清抗PT 中和抗体的检测方法,该方法具有良好的重复性,可用于评价抗PT 中和抗体的功能.