BRCA基因突变检测的标准化研究

目的 使用BRCA基因突变国家参考品,评价BRCA1/2基因突变检测试剂盒(联合探针锚定聚合测序法)的性能.方法 取国家参考品的基因组DNA,进行打断和末端修复,获得片段化的DNA.使用连接酶在DNA两端加上接头.经pre-PCR扩增获得杂交前文库(pre-PCR文库),再用探针特异性捕获含目标区域的DNA片段,经post-PCR扩增获得杂交后文库(post-PCR文库).使用通用测序试剂盒进行测序,得到原始下机数据.通过数据分析,得到国家参考品的BRCA基因变异信息,从而对试剂盒的准确性、特异性和重复性进行评价.结果 试剂盒能够准确检出试剂盒检测范围内的BRCA基因突变位点,并且按照BRCA基因解读规则能够进行正确解读;没有检出其他非标示的致病性或疑似致病性突变位点.使用同一批次试剂盒重复检测国家参考品3次,每次结果均能满足准确性和特异性的要求.结论 BRCA基因突变国家参考品可以用于评价BRCA1/2基因突变检测试剂盒(联合探针锚定聚合测序法)的性能,实现对BRCA基因突变检测的标准化.