微小RNA-155对人胚胎干细胞诱导分化的心房肌细胞L型钙通道α1c影响的实验研究

目的:探讨微小RNA(microRNA，miR)-155对人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化的心房肌细胞L-型钙通道α1c(Cav1.2)钙电流(I Ca-L)、基因及蛋白表达的影响。 方法:诱导并鉴定H7hESCs(购自中国科学院)分化获得的人心房肌细胞(分化第8～10天可获得)，向心肌细胞转染含有miR-155前体序列或反义序列的慢病毒，分为对照组、miR-155模拟物(Mimics)组、miR-155抑制子(Inhibitors)组。于72 h后，运用膜片钳、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测I Ca-L、mRNA及蛋白的变化。组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:成功获得心房肌细胞，转染miR-155模拟物后，miR-155表达高于对照组(25.52±3.63比1.00±0.00， t＝11.713， P<0.05)，差异有统计学意义。转染miR-155抑制子后，miR-155表达低于对照组(0.59±0.07比1.00±0.00， t＝10.933， P<0.05)，差异有统计学意义。膜片钳结果发现miR-155上调组I Ca-L明显低于对照组(-9.79±3.70比-14.27±3.95， t＝2.611， P<0.05)，差异有统计学意义，RT-qPCR及Western blot证实，miR-155上调组Cav1.2的mRNA表达量(0.45±0.06比1.00±0.00， t＝17.226， P<0.05)及蛋白表达量(0.71±0.07比1.00±0.00， t＝7.708， P<0.05)均低于对照组，差异均有统计学意义。 结论:对于hESCs诱导的心房肌细胞，上调miR-155可导致Cav1.2蛋白表达水平下降，I Ca-L电流减小，可能参与心房肌细胞的电重构。