转录因子c-Jun对人血管平滑肌细胞增殖的调控作用及其机制的实验研究

目的:通过下调和上调c-Jun在人血管平滑肌细胞(hVSMCs)中的表达,研究c-Jun对hVSMCs增殖的调控作用及其机制.方法:①1-Jun基因低表达实验:体外培养hVSMCs,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和siRNA干扰组(转染靶向c-Jun的siRNA)三组,用构建好的siRNA转染各组细胞并培养24 h.②c-Jun基因过表达实验:体外培养hVSMCs,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(转染阴性对照病毒载体)和慢病毒组(转染过表达c-Jun的慢病毒载体)三组,用构建好的慢病毒转染各组细胞并培养48 h.完成上述的细胞转染后,光镜观察各组细胞的生长情况,加入CCK-8试剂检测各组细胞的OD值.Western Blot检测c-Jun基因、线粒体融合基因2(Mfn2)的表达以及RAS-RAF-MEK-ERK1/2信号通路蛋白的表达.结果:siRNA干扰c-Jun表达后,与阴性对照组(1.301±0.027)或空白对照组(1.223±0.016)相比,siRNA干扰组(1.759±0.023)的OD值显著增加(P＜0.05),Mfn2的表达下调,RAS、RAF、MEK以及ERK1/2蛋白的表达显著增加(P＜0.05).相反,慢病毒过表达c-Jun后,与阴性对照组(1.660±0.009)或空白对照组(1.862±0.123)相比,慢病毒组(1.101±0.101)的OD值显著减少(P＜0.05),Mfn2的表达上调,RAS、RAF、MEK以及ERK1/2蛋白的表达显著减少(P＜0.05).结论:c-Jun可能通过调控Mfn2-RAS-RAF-MEK-ERK1/2信号通路调节hVSMCs的增殖.