传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定

为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒(IBV)反应的广谱性单克隆抗体,反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株.通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/CH/JS/2010/12株N基因,分别插入原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1构建了重组质粒pET-N和pGEX-N,并在大肠杆菌中进行原核表达,通过亲和纯化获得His-N和GST-N两种重组融合蛋白.用GST-N融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组蛋白His-N作为检测抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞.经过筛选和亚克隆,共获得12株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.Western blot结果显示8株单克隆抗体能与测试的所有基因型IBV发生特异性反应,另外4株可以与793B型4/91株以外的其他毒株发生反应.本研究成功获得了广谱性IBV单克隆抗体,为进一步研究建立通用性IBV抗原检测方法奠定了基础.