STIM1/ORAI1复合体参与调节人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成

为研究基质交联分子1(STIM1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操-纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca2+内流和NO生成中的作用.采取2-3代HUVECs随机分组,将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒分别转染人HUVECs.用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测STIM1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达.细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组(Control组)及空质粒组(Scrambled组),将上述3组细胞分别与四种不同处理因素刺激后用荧光探针Fura-2/AM检测[Ca2+]i变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测NO生成的变化.随后将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒同时转染人HUVECs,与CaR激动剂精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO,用免疫共沉淀法检测STIM1和ORAI1的相互作用.结果显示,(1)与对照组相比,STIM1及ORAI1组,mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05);(2)在4种不同处理因素作用下,STIM1及ORAI1转染组中[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05);(3)与对照组及单转染STIM1及ORAI1组比,共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05);(4) STIM1与ORAI1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的刺激下相互作用增强.由此可知,STIM1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成.