番茄SlWRKY31基因启动子的克隆与逆境应答模式分析

该研究以野生型番茄(Solanum lycopersicum )为材料,采用PCR技术克隆得到了番茄 SlWRKY3 1 基因起始密码子 ATG 上游启动子序列,并利用该启动子驱动GU S基因在野生型番茄中表达,对获得的转基因番茄采用不同胁迫处理后进行 GUS 染色和定量分析.结果表明:(1)序列分析显示,该启动子全长 1 849 bp,含有多个与非生物胁迫和激素响应相关的顺式作用元件,主要包括热胁迫响应元件 HSE、干旱诱导响应元件 MBS、防卫和胁迫响应元件 TC-rich repeats、创伤诱导响应元件 WUN-motif、脱落酸(ABA)响应元件 ABRE 和水杨酸(SA)响应元件TCA-element.(2)实时荧光定量 PCR 结果显示,SlWRKY31 基因呈组成型表达模式,且在叶和果实中表达量较高,茎中较低;在 NaCl、甘露醇、SA、ABA 和42 ℃ 高温的胁迫处理下,其表达量显著升高.(3)构建SlWRKY31 启动子和GUS 基因融合的植物表达载体,并通过农杆菌介导法将其转化野生型番茄,对获得的转基因番茄进行GUS 组织化学染色分析结果显示,SlWRKY3 1 基因在番茄的各个组织(根、茎、叶、花、果实和种子)中均有表达,表明 SlWRKY31 启动子是组成型表达启动子.(4)对转基因番茄在不同胁迫处理后的 GUS 染色和定量分析显示, SlWRKY31 启动子显著受到 NaCl、甘露醇、SA、ABA 和42 ℃ 高温的诱导表达,说明该启动子是一个可以响应多种逆境胁迫的诱导型启动子.