杏鲍菇蓝光受体wc-1基因的克隆与原核表达

光照是高等真菌子实体发育必不可少的环境因子之一,真菌通过光受体感受光信号,WC-1蛋白既有对光信号应答能力,又可以作为转录因子,激活下游基因表达.为了对真菌光感应系统作进一步研究,本研究利用杏鲍菇Ple-tm菌株转录组数据,采用RT-PCR方法克隆获得了杏鲍菇wc-1基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-wc-1并转化大肠杆菌BL21,诱导表达.结果 显示:wc-1基因(GenBank登录号:MG705181)长为2 614 bp,含有一个2 205 bp的开放阅读框(open reading frame,OFR),编码734个氨基酸,理论分子量(molecular weight,Mw)为81kD,等电点(isoelectric point,PI)为6.29.同源性比对发现,与平菇中蓝光受体在氨基酸水平上相似性达82％以上,显示其较高的保守;成功构建含有wc-1基因的原核表达载体pET-28a(+)-wc-1,体外诱导表达出融合蛋白,该重组蛋白在18℃、0.1 mmol/L IPTG、12h时表达量最大,且以包涵体的形式存在.本研究结果为深入研究杏鲍菇子实体形成机理及蓝光受体蛋白的结构奠定了基础.