基于HPV16 E7蛋白CTLs抗原肽的病毒样颗粒治疗性疫苗的构建

目的:构建呈递HPV16 E7 CTLs抗原表位的病毒样颗粒,并初步评价病毒样颗粒作为治疗性疫苗载体的潜能.方法:根据文献选择有效的HPV16 E7 CTLs表位,合成其正负链寡核苷酸序列,并通过退火形成双链DNA片段.将片段克隆于表达乙肝核心抗原的重组质粒pThioHisA-HBcAg,使抗原肽得以呈现于病毒样颗粒.重组菌经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定目的蛋白表达.菌体破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜鉴定病毒样颗粒的存在.制备的病毒样颗粒免疫接种了TC-1细胞的肿瘤模型小鼠,检测小鼠肿瘤大小.此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平.结果:构建的三个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建正确.表达的重组蛋白大小与预期相符,并形成了病毒样颗粒.免疫小鼠后显示了抑制肿瘤增长的一定作用趋势.此外,抗原肽体外刺激促进了疫苗免疫小鼠脾细胞IFN-γ的表达,显示疫苗引起机体产生E7特异性的细胞免疫应答.结论:HBcAg VLPs是有潜能的治疗性疫苗载体.