猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV gB糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为gB872.以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-gB间接ELISA抗体检测方法.该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1:128,高于IDEXX PRV/ADV gB抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10％,重复性良好.利用该方法与BioChek PRV-gB抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100％,阴性符合率为97.67％,总体符合率为97.78％;同时,采用该方法与IDEXX-gI(gE)和IDEXX-gB试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致.本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法.