诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的分泌表达

目的 探讨诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性.方法 用pPICZa-A表达载体和X-33毕赤酵母株进行NoV GⅡ.4和GⅡ.17型VP1蛋白的分泌表达,并对阳性菌株进行Mut表型筛选.同时优化起始pH(5.0、6.0、7.0、8.0)、甲醇终浓度(0.5％、1.0％、1.5％、2.0％)及发酵时间(24、48、72、96、120 h)3个表达条件.取原始及传代10代菌株,采用优化条件进行发酵,于诱导0 ～60 h间,通过双标准曲线实时荧光定量PCR法测定外源基因拷贝数.发酵产物经蔗糖密度梯度离心纯化后,检测其浓度及纯度,并观察VLP的形态.结果 表达目的 蛋白的重组酵母菌株均为Mut+型.最佳发酵pH为7.0,甲醇终浓度为1％,发酵时间为72 h.菌株传代后未发生基因缺失,整合基因在10代内稳定性良好.GⅡ.4及GⅡ.17型VP1纯度均约85％,浓度分别为133和165 μg/mL,VP1蛋白均可自发组装成直径约40 nm的VLP颗粒,形态与天然病毒相似.结论 用毕赤酵母表达系统进行NoV VP1蛋白VLP分泌表达是可行的.